考马斯亮蓝法（考马斯亮蓝法测蛋白质含量的原理）

考马斯亮蓝法测蛋白质含量原理

蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡考马斯亮蓝法，完成反应十分迅速考马斯亮蓝法；其结合物在室温下1h内保持稳定。

考马斯亮蓝测定蛋白质含量的原理是染料结。在酸性条件下考马斯亮蓝法，考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合，导致最大吸收峰由465nm变为595nm，同时颜色也由棕色变为蓝色，该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。

Bradford法，也称考马斯亮蓝法，是通过蛋白质与考马斯亮蓝结合后产生的颜色变化来测定蛋白质含量。其基本原理是，亮蓝在电离状态下显示棕红色，与蛋白质结合后变为蓝色，吸收光峰在595nm处，吸光值与蛋白质含量成正比。

考马斯亮蓝（Coomassie Brilliant Blue）法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质—染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。这种蛋白质测定法具有超过其考马斯亮蓝法他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。

考马斯亮蓝测定蛋白质的原理是基于蛋白质与考马斯亮蓝G-250染料的结合反应。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，其最大光吸收峰位于488nm。当考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后，其光吸收峰位移至595nm，溶液的颜色也由红色变为青色。

bradford法测定蛋白质含量，也就是考马斯亮蓝法，其原理是考马斯亮蓝在游离状态下呈棕红色，最大光吸收在488nm； 当它与蛋白质结合后变为蓝色，蛋白质—色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。

考马斯亮蓝法的干扰因素

1、考马斯亮蓝法主要是用来测定蛋白质浓度的，它的干扰因素包括： 有一些物质会干扰考马斯亮蓝法，主要的干扰物质有：去污剂、Triton X-100、十二烷基硫酸钠（SDS）和0.1N的NaOH。

2、特定蛋白质的结构可能导致反应效果不一致。小分子碱性多肽如核糖核酸酶或溶菌酶可能不适合此法，去污剂如TritonX-100、SDS、NP-40浓度超过0.2%时会对结果产生干扰。蛋白质中精氨酸和芳香族氨基酸含量的差异，使得不同蛋白质在使用考马斯亮蓝法时，测定结果可能存在较大偏差。

3、尤其在5到20分钟之间，颜色的稳定性最佳，无需像Lowry法那样严格控制时间。再者，考马斯亮蓝法对于一些常见的干扰物质具有良好的耐受性。Lowry法中常见的干扰因素如钾离子、钠离子、镁离子、Tris缓冲液、糖类、甘油、巯基乙醇和EDTA等，都不会影响考马斯亮蓝法的测定结果。

4、因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量。不利因素主要是特殊蛋白的结构，缓冲液组分中有干扰试剂等。

5、Bradford法，也称考马斯亮蓝法，是通过蛋白质与考马斯亮蓝结合后产生的颜色变化来测定蛋白质含量。其基本原理是，亮蓝在电离状态下显示棕红色，与蛋白质结合后变为蓝色，吸收光峰在595nm处，吸光值与蛋白质含量成正比。

6、在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应时间不得超过30min。 根据标准曲线计算待测样本的浓度。Bradford 法（考马斯亮蓝法）提供了一种快速、简便且灵敏度高的蛋白质定量方法，适用于大多数蛋白质的定量分析，但在使用时需注意可能的干扰因素，并严格控制实验条件以确保结果的准确性。

考马斯亮蓝法的优缺点

根据查询智慧城市网考马斯亮蓝法，嘉峪检测网得知考马斯亮蓝法，考马斯亮蓝法是一种常用的测定蛋白质浓度的方法，它的优点是考马斯亮蓝法：灵敏度高，可以检测到微量的蛋白质，最低检测量可达1微克。操作简单，只需加入一种试剂，反应时间短，颜色稳定。

测定蛋白质含量，有多种方法，其中考马斯亮蓝法和Folin酚法是灵敏度最高的两种方法，各有优缺点：考马斯亮蓝法干扰物质少，颜色稳定， 颜色深浅随不同蛋白质变化，标准曲线有轻微的非线性；Folin酚法操作要严格计时，颜色深浅随不同蛋白质变化，标准曲线不是严格的直线形式，且专一性差。

灵敏度差异：考马斯亮蓝法相对于紫外分光光度法具有更高的灵敏度，能够检测出较低浓度的蛋白质。这是因为在该方法中，染料与蛋白质的结合使得复合物在595nm波长处的吸光度值发生变化，从而提高考马斯亮蓝法了检测的灵敏度。而紫外分光光度法在检测低浓度蛋白质时可能受到限制。

微量凯氏定氮法凯氏法是标准检验，适用于总蛋白测定，优点在于通用性强，成本低，但耗时较长，检出限为0.2~1mg蛋白含量。非蛋白氮无法检测。双缩尿法此法简便快速，但需代表性标准物，适合总蛋白测定，检出限1-20mg，对特定氨基酸成分敏感。